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細(xì)胞株定期維護(hù)與監(jiān)測要做好哪些?

原載自:www.xrpalvh.cn[技術(shù)資料頻道]  2024-11-12  瀏覽次數(shù):227

  細(xì)胞株在生物學(xué)研究、藥物研發(fā)、醫(yī)學(xué)診斷等眾多領(lǐng)域都有著至關(guān)重要的作用。為了確保細(xì)胞株的質(zhì)量和穩(wěn)定性,定期維護(hù)與監(jiān)測不能缺少。
  一、細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的維護(hù)
  細(xì)胞株培養(yǎng)對環(huán)境要求嚴(yán)苛,因此環(huán)境維護(hù)是關(guān)鍵。首先是培養(yǎng)箱的溫度,大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞適宜在37℃左右生長,需定期校準(zhǔn)培養(yǎng)箱溫度傳感器,確保溫度穩(wěn)定,避免溫度波動(dòng)對細(xì)胞造成損害,如溫度過高可能導(dǎo)致細(xì)胞蛋白變性,過低則會(huì)影響細(xì)胞的代謝速率。
  濕度也不容忽視,一般維持在95%左右的相對濕度,可防止培養(yǎng)基揮發(fā)過快,保證細(xì)胞生長環(huán)境的穩(wěn)定。同時(shí),要注意培養(yǎng)箱內(nèi)的CO?濃度,對于常用的含碳酸氫鈉緩沖體系的培養(yǎng)基,5%~10%的CO?濃度能維持培養(yǎng)基合適的pH值。定期檢查CO?供應(yīng)系統(tǒng)和濃度監(jiān)測裝置,保障CO?濃度準(zhǔn)確。
  二、培養(yǎng)基的更換與管理
  培養(yǎng)基為細(xì)胞生長提供營養(yǎng)物質(zhì)和適宜的生存條件。根據(jù)細(xì)胞類型和生長速度,定期(通常2~3天)更換新鮮培養(yǎng)基。在更換過程中,要注意無菌操作,防止微生物污染。同時(shí),觀察培養(yǎng)基的顏色和透明度變化,若培養(yǎng)基變黃,可能提示細(xì)胞代謝過快或有污染;若出現(xiàn)渾濁,則很可能有微生物污染。
  此外,不同細(xì)胞株對培養(yǎng)基成分有特定要求,要選擇合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,并根據(jù)需要添加血清、生長因子等補(bǔ)充成分。在長期培養(yǎng)過程中,注意培養(yǎng)基批次間的差異,盡量使用同一批次或經(jīng)過驗(yàn)證質(zhì)量穩(wěn)定的培養(yǎng)基。
  三、細(xì)胞形態(tài)和生長狀態(tài)的監(jiān)測
  定期觀察細(xì)胞形態(tài)是判斷細(xì)胞健康狀況的重要手段。在顯微鏡下,正常細(xì)胞應(yīng)具有特定的形態(tài)特征,如貼壁細(xì)胞應(yīng)呈均勻的多邊形且貼附牢固,懸浮細(xì)胞應(yīng)大小均勻、圓潤。若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落(貼壁細(xì)胞)或聚團(tuán)等異常現(xiàn)象,可能是受到污染、營養(yǎng)缺乏或培養(yǎng)條件不適等因素的影響。
  同時(shí),監(jiān)測細(xì)胞的生長速度。可通過細(xì)胞計(jì)數(shù)、繪制生長曲線等方法來評估。生長速度異常減慢或加快都可能提示細(xì)胞株存在問題,如細(xì)胞老化、基因突變或污染等。
  四、微生物污染的檢測
  微生物污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。要定期進(jìn)行微生物檢測,包括細(xì)菌、真菌、支原體等的檢測。可使用染色法、培養(yǎng)法或?qū)iT的檢測試劑盒。如支原體污染較為隱匿,可采用熒光染色法或PCR檢測法。一旦發(fā)現(xiàn)污染,要立即處理,避免污染擴(kuò)散,若細(xì)胞株被污染嚴(yán)重,可能需要丟棄并重新復(fù)蘇新的細(xì)胞株。
  細(xì)胞株的定期維護(hù)與監(jiān)測需要從環(huán)境、培養(yǎng)基、細(xì)胞狀態(tài)、污染檢測等多個(gè)方面入手,只有這樣才能保證細(xì)胞株的質(zhì)量和穩(wěn)定性,為科學(xué)研究和應(yīng)用提供可靠的細(xì)胞資源。

 

 

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